蒸发光散射检测器克服常见的HPLC检测难题

虽然蒸法光散射检测器(Evaportive light Scattering,ELSD)已经开发生产15年，但是对于许多色谱工作者来说，它仍是一个新产品。第一台ELSD是由澳大利亚的Union Carbide研究实验室的科学家研制开发的，并在八十年代初转化为商品，八十年代以激光为光源的第二代ELSD面世。此后，通过不断设计提高了ELSD的操作性能。现在ELSD越来越多的作为通用型检测器]用于高效液相色谱，超临界色谱（SFC）和逆流色谱中。ELSD最大的优越性在于能检测不含发色团的化合物，如：碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂、药物，并在没有标准品和化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物 。
ELSD的通用检测方法消除了常见于传统HPLC检测方法中的难点，不同于紫外和荧光检测器，ELSD的响应不依赖与样品的光学特性，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测，不受其官能团的影响。ELSD的响应值与样品的质量成正比，因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物。示差检测器（RI）也可以说是一种通用型检测器，打它灵敏度低，并与梯度脱洗不相容。质谱是另一种通用型检测器，但它的昂贵操作费用和复杂性限制了它的应用。
ELSD的独特检测方法，对于它的多种用途和高性能至为关键。ELSD检测只要分为三个步骤：（1）用惰性气体雾化脱洗液（2）流动相在加热管（漂移管）中蒸发（3）样品颗粒散射光后得到检测。
讨论:
UV检测的主要缺点在于紫外不吸收的化合物灵敏度很低。ELSD可以检测任何挥发性低于流动相的样品。ELSD的通用性响应值使得ELSD响应值比UV响应值更能代表样品的质量
不同于紫外检测只能使用不吸收紫外的流动相，ELSD能与任何的挥发性流动相相容，不论其光学特性。您可根据样品的溶解度或分离特性选择流动相，例如选择氯仿和丙酮用于脂类的分离以提高样品的溶解性。用紫外检测器定量未知物是困难的，因为样品的紫外吸收值往往和代表样品的质量的色谱峰的大小无关。ELSD对几乎所有的样品给出一致的响应因子。因此可以通过和内标比较定量未知化合物，此特性对于使用组合化合技术而合成的系列化合物的定量尤其有用。用组合合成技术合成的化合物通常是用HPLC联合低波长紫外或质谱检测进行分析，但是，在缺乏已表面活性剂非常灵敏，并在梯度脱洗下维知结构参数已知的参照标准品情况下，两种方法都不能准确的定量分析此种系列化合物。
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1楼：RE:【资料】蒸发光散射检测器克服常见的HPLC检测难题 示差检测：
虽然示差检测在原理上是通用型检测器，但是它的灵敏度低，和梯度脱洗不相容，因此它对于HPLC来说不是理想的检测器。室温的变化会影响基线的稳定性，大的溶剂前沿峰可能会掩盖前期脱洗的色谱峰。因为ELSD在检测前将流动相蒸发，所以基线的噪声和漂移都很小，因此基线稳定和样品检测的灵敏度高。流动相的蒸发使得ELSD和梯度脱洗相容，因而可提高色谱分离的分辨率和缩短分离时间。另外ELSD比RI检测蔗糖灵敏度高和基线稳定。
应用实例：
近年来，脂类在生物学和经济领域中的重要性正在日益引起广泛的关注。脂类的分析方法对于许多研究工作，临床使用和质量控制方面都非常重要。大多数的脂类分子都缺乏适当的发色团，因此脂类除非通过衍生化，否则不能用紫外检测。一般但一样品种含有的各种脂类其极性差异很大，弱项要达到个作分的最佳分离和分辨率需要使用梯度脱洗，因而限制了示差检测器的使用。不同于UV和RI的局限性，ELSD是脂类检测的有用工具。
碳水化合物不带有发色团，因而不能用UV来检测。他们通常用氨基柱或者阳离子交换树脂分离。但是示差检测器不是很灵敏，而且需要控制温度来维持基线稳定，不能与梯度脱洗相容。ELSD灵敏度高，基线稳定，与梯度脱洗相容。
随着高聚物和表面活性剂在许多行业中的广泛应用，简单和可靠的分析方法的尤为重要，他们通常是不含有发色团的复合分子。此类化合物不带有适当的发色团和分离是需要采用梯度脱洗意味着不能采用示差和紫外检测器。ELSD检测高聚物和表面活性剂可以保持基线稳定。
在科研、临床和生产的工艺控制上，药物需要分析评估。目前，随着日益增长的加速药品开发的要求，药品工作者需要一种开速的鉴定方法来测定带物的代谢物、杂质、降解物和各种天然产物，许多不含有适当的发色团，限制了紫外检测器的使用。示差比紫外检测器的灵敏度要低，且不能与梯度脱洗相容，而复杂的药品分析常需要梯度脱洗。ELSD的通用检测能力和梯度相容性使得ELSD是药物分析的理想工具。因为ELSD的响应接近于代表产品的质量，所以即使在降解产物和杂质的性质不明确的情况下ELSD的使用为药物杂质分析提供最快速的方法。
结论： 蒸发光散射检测器正日益成为分析碳氢化合物、表面活性剂、聚合物、脂肪酸和氨基酸、油、和其他难检样品的强大工具，多用途的ELSD能检测任何挥发相低于流动相的样品，克服了常见于示差和紫外检测器的缺点。

5楼：RE:【资料】蒸发光散射检测器克服常见的HPLC检测难题
05版药典中已经有不少的药物规定必须用蒸发光散射检测器来检测的了。
真是一个好的检测器，只是价钱有点高了。
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7楼：RE:【资料】蒸发光散射检测器克服常见的HPLC检测难题 蒸发光散射检测器ELSD原理与应用说明

蒸发光散射检测器ELSD（Evaporative Light-scattering Detector）是一种广谱型，通用性质量浓度型检测器。几乎对所有样品都能有响应。这种检测器刚开始主要应用于高效液相色谱系统（HPLC），现已广泛而成功地应用于各种各样的色谱系统。依据其原理，对待测样品只要求其挥发性小于流动相的挥发性。

一、蒸发光散射检测器ELSD检测原理：
第一步：雾化，仪器内有一特殊装置，流动相流经此处，与氮气或空气混合，形成雾状液体，即称“液雾”。
第二步：蒸发，紧随雾化装置是“漂移管”，液雾在“漂移管”中移动，此时，液雾中的易挥发的流动相气化而挥发，不易挥发的样品即形成微小颗粒。
第三步：检测，流过蒸发区段后流动相完全挥发，样品即已形成微小颗粒，这些颗粒通过激光束时，造成光束散射。通过散射的光，产生电信号。

二、蒸发光散射检测器ELSD应用
蒸发光散射检测器是质量型检测器，只与待测物质的量相关，无所谓其光学性质或电化学性质。因此对于许多没有光学吸收特征的生物性物质的检测，蒸发光散射检测器提供了新一代的检测方法。
中药中的有效成分大多为生物碱或生物甙类化合物如人参皂苷、黄芪甲苷、银杏内酯等，这些物质都没有紫外吸收或只有边缘吸收，紫外检测几乎不可能，而示差折光检测的灵敏度太低，对这些低浓度有机物质的检测也无能为力。ELSD检测器为我们提供了新一代的检测手段。
在天然产物提取物成分定量分析中，为了更经济、更有效获得更准确的分析结果，以 GC/FID，HPLC-UV/ELSD各自特长组合的一组配置，作为价廉物美的分析仪器组合，其测量范围几近全面覆盖天然有机化合物，满足现实工作中对天然药物定量分析的迫切需要。这种配置的原则是优势互补，用最佳仪器性能针对不同天然有机化合物沸点特征，浓度特征，光谱吸收特征进行检测，以取得最佳的测量结果，是中药及生物新药开发研究的有用工具。
广泛的应用还包括：
类脂及脂肪酸类物质，他们有较高的沸点和不稳定性，不便于应用气相色谱检测。 又没有特殊的光学特征，只有HPLC/ELSD才能取得最佳的测量结果糖及糖类化合物，脂肪酸类化合物，多元醇等天然产物均无紫外吸收，只能依靠HPLC/ELSD检测。
合成及天然高分子化合物（如多肽， 蛋白质， 核酸，肝素，粘多糖等）仅有微弱的紫外吸收，HPLC/ELSD能获得更好的检测效果。
其他还包括类固醇甾体激素类化合物，氨基酸类，许多滥用药物等。

三、SofTA Model 300S ELSD介绍
1）应用SofTA专利的热分流技术，精密控制蒸发。
2）目前市场上唯一能制冷运行的ELSD，对有机流动相和无机流动相均可实现低温操作。
3）目前市场上唯一使用Teflon喷雾器的ELSD。
4）独一无二的雾化区温度控制，实现了无级分流。
5）明亮易于观察的真空荧光显示屏（Vacuum Florescent Display）
6）可内存10个不同的检测方法
Model 300S优点
设计精巧的M300S，可以方便的与任何分析及制备的HPLC系统联机使用，平衡时间短，操作极其简单！
选择预置优化设置，该参数条件能满足中国药典载入的所有样品的HPLC-ELSD检测方法。
天津科美特仪器有限公司

Model 300S 性能参数
喷嘴 Teflon喷嘴，抗堵塞，抗磨损，抗腐蚀，不需清洗维护
液雾分流模式 热分流专利技术，通过控制雾化区温度实现无级分流控制，因而无论是高沸点、低沸点或梯度分离的应用，都可得到最佳分流设置。
雾化区温度 10oC– 70oC
漂移管温度 室温 – 120oC
光源 近红外激光(650nm)，小于5mW，符合FCC眼安全标准。
检测元件 内置高倍放大器全密封大面积硅光二极管。
灵敏度 100pg, Glucopyranoside, Micro-HPLC
峰宽 3秒（10%峰高，2ul直接进样）
给定增益下的
动态范围 正常：3个数量级
低增益：3个数量级
动态跟踪：4-4.5个数量级
液相流量 多达5mL/min
气相要求 50 psi，氮气或其它惰性气体
气体消耗 ≤2.5L/min
气量控制 内置稳压阀，使用者无须调节进气压力或流速。
内置过压保护。
内置进气阀，进气阀可自动延时关闭，防止由于使用后忘记关闭气罐而放光整罐气体。
液路材料 Teflon，不锈钢，氧化铝，玻璃（镜头）
用户界面 4个多功能按钮
仪表显示与
控制 检测信号，温度，压力，滤波常数，实时自检信息
蜂鸣器控制 智能仪表状态提示，出错报警。
信号输出 固定：10mV，5V
自选：0-5V
计算机接口 RS232
后面板接口 进气阀控制，清零控制，仪表状态输出，操作错误输出
电源 120V/240V, 60/50Hz, 600W
重量 15 kg
尺寸 25W×45D×29H(cm)

引文来源 【资料】蒸发光散射检测器克服常见的HPLC检测难题